对“实事求是”作出全新的马克思主义解释，使之内涵精义升华，并用之来概括中国共产党思想路线的是毛泽东。毛泽东指出：“‘实事’就是客观存在着的一切事物，‘是’就是客观事物的内部联系，即规律性，‘求’就是我们去研究。我们要从国内外、省内外、县内外、区内外的实际情况出发，从其中引出其固有的而不是臆造的规律性，即找出周围事变的内在联系，作为我们行动的向导。”[1]经毛泽东改造发展之后，“实事求是”成为一个马克思主义的哲学范畴。正如邓小平所说，“马克思、恩格斯创立了辩证唯物主义和历史唯物主义的思想路线，毛泽东同志用中国语言概括为‘实事求是’四个大字”[2]。
从总体上看，实事求是原则有两个层次：第一个层次，“实事求是，是无产阶级世界观的基础，是马克思主义的思想基础”[3]；第二个层次，“实事求是，是毛泽东思想的出发点、根本点”[4]，是“毛泽东思想的精髓”[5]。
这两个层次既有联系又有区别。这是因为，作为马克思主义思想基础的实事求是，是辩证唯物主义和历史唯物主义基本原理的结晶，但它只是一般哲学原理的要求和反映；作为毛泽东思想出发点、根本点和精髓的实事求是，则是中国化的马克思主义，已经成为中国共产党的思想路线。从作为辩证唯物主义和历史唯物主义原理的实事求是，到作为中国共产党思想路线的实事求是，是中国革命发展的历史产物，有着自己形成的独特的历史条件。